凱氏定氮法測定大豆肽中蛋白質(zhì)含量
1 前言
大豆肽粉是一種由2-6個氨基酸組成的、分子量在200-800 Dalton 的混合肽產(chǎn)品。與原蛋白相比，大豆肽粉具有很好的水溶性、持水性、起泡性，能在pH2-10的任何酸堿條件下完全溶解。大豆肽粉能與其它食品配料完全溶合，并保持各自原有的物化及營養(yǎng)特性。與原蛋白和同組成的氨基酸制劑相比，大豆肽粉更易被人體吸收，它可不經(jīng)胃腸消化，直接進入小腸被吸收，而且不受身體狀況所影響。
大豆肽的分級標(biāo)準(zhǔn)中，粗蛋白含量作為其中一個重要的指標(biāo)。因此測定大豆肽的蛋白質(zhì)含量具有重要意義。
2 實驗部分
2.1原理
根據(jù)國標(biāo)《GB/T22492-2008大豆肽粉》中大豆肽粉在濃硫酸和催化劑的共同作用下，由有機態(tài)的氮轉(zhuǎn)化為氨態(tài)氮。加堿蒸餾后，用硼酸吸收后，再以硫酸標(biāo)準(zhǔn)滴定液進行滴定。
2.2 儀器與試劑、器具
2.2.1 K1100F全自動凱氏定氮儀(濟南海能儀器股份有限公司)。
2.2.2 SH420F石墨消解儀(濟南海能儀器股份有限公司)。
2.2.3 硫酸 分析純，c(HCL)=0.1mol/L，標(biāo)準(zhǔn)滴定液。
2.2.4 硼酸 分析純，質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%。
2.2.5 氫氧化鈉 分析純，質(zhì)量分?jǐn)?shù)40%。
2.2.6 溴甲酚綠-甲基紅混合指示劑 將溴甲酚綠乙醇溶液(1g/L)與甲基紅乙醇溶液(1g/L)按5+1體積比臨時混合搖勻備用。
2.2.7 催化劑片 3g硫酸鉀和0.2g硫酸銅混合均勻壓片
2.2.8 50ml量筒
2.2.9 稱量瓶
2.3 實驗部分
2.3.1取樣：取0.5g左右的樣品，稱量紙包好一并投入消化管中，加一片催化劑片（或者3g硫酸鉀、0.2g硫酸銅），加入10ml濃硫酸。
2.3.2消解：利用石墨消解爐進行消解，將消化管放在石墨爐上，蓋上排氣罩，連接廢氣吸收系統(tǒng)，消化完畢后，將消化管取下冷卻至室溫。消化過程采用直線升溫模式，逐漸升溫至420度，消解1小時。
2.3.3 待消化管內(nèi)溶液冷卻至室溫后，將消化管放置于定氮儀上。定氮儀設(shè)置程序如下：
硼酸：35ml
堿：40ml
蒸餾時間：5min
2.3.4 儀器自動滴定并給出計算結(jié)果。
蛋白質(zhì)含量 P%=N（%）×6.25
式中：M-標(biāo)準(zhǔn)酸摩爾濃度（mol/L)
W-樣品質(zhì)量（g）
V0-空白樣滴定標(biāo)準(zhǔn)酸消耗量（mL）
V-樣品滴定標(biāo)準(zhǔn)酸消耗量（mL），精確到小數(shù)點后四位
3 結(jié)果與討論
大豆肽中蛋白質(zhì)含量作為一個重要的分級標(biāo)準(zhǔn):
