全自動機(jī)械臂固相萃取儀－高效液相色譜法檢測水質(zhì)中苯并（a）芘殘留量
1 前言
水是生命之源，人們生活和生產(chǎn)中都離不開水，水質(zhì)的優(yōu)劣與人類的健康息息相關(guān)。多環(huán)芳烴（PAHs)是指兩個或兩個以上的苯環(huán)按線性、角狀或簇狀方式稠合在一起的一類中性或非極性有機(jī)化合物，可分為芳香稠環(huán)型及芳香非稠環(huán)型。PAHs在環(huán)境中含量甚微但分布廣泛，一些PAHs中除含有致癌和突變的成分外，還含有多種促進(jìn)致癌的物質(zhì)，對人體健康產(chǎn)生很大的威脅。采用海能全自動固相萃取儀-高效液相色譜法進(jìn)行檢測水質(zhì)中苯并（a）芘農(nóng)藥殘留，有效的縮短樣品中目標(biāo)物的固相凈化所需要的時間，提高了工作效率，也節(jié)約了人力；且能精準(zhǔn)的控制上樣、淋洗、洗脫等溶劑流速，提高了樣品目標(biāo)物的回收率。
2 儀器與試劑
2.1儀器
SPE400全自動機(jī)械臂固相萃取儀；HN200多功能氮吹儀；高效液相色譜儀；分析天平；其他常規(guī)玻璃儀器；濾膜（有機(jī)相，0.22μm）。
2.2試劑及耗材
實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T6682中三級用水的規(guī)格，使用試劑除特殊說明外，均為色譜純。
正己烷（色譜純）；乙腈（色譜純）；甲醇（色譜純）；十氟聯(lián)苯（純度：99%）；二氯甲烷（色譜純）；硫代硫酸鈉。
固相萃取柱：C18，1000mg/6ml。標(biāo)準(zhǔn)溶液：苯并芘100μg/mL，乙腈作為溶劑。
無水硫酸鈉：在400℃下烘烤2h，冷卻后，貯于磨口玻璃瓶中密封保存。
氯化鈉：在400℃下烘烤2h，冷卻后，貯于磨口玻璃瓶中密封保存。
20.0mg/L苯并芘標(biāo)準(zhǔn)溶液：質(zhì)量為200gm/L的乙腈溶液，取其1mL于10mL容量瓶取中，用乙腈稀釋至刻度即可，在4℃下冷藏。
1000μg/mL十氟聯(lián)苯標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液：稱取十氟聯(lián)苯0.025g，于25mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度即可。
淋洗液：二氯甲烷/正己烷（1+1）混合溶液（V/V）。
干燥柱：長250mm，內(nèi)徑10mm玻璃柱；柱下端放入玻璃纖維，加入10g無水硫酸鈉。
3 實(shí)驗(yàn)方法
3.1取樣
采集樣品于預(yù)先洗凈烘干的采樣內(nèi)，并注滿。若水樣中存在殘余氯，則需加入在每升樣品中加入80mg硫代硫酸鈉除氯。
3.2樣品制備
在水樣中加入5g氯化鈉和10ml甲醇，及50μL十氟聯(lián)苯溶液，混勻備用。
3.3固相萃取柱凈化（C18柱）
表1 固相凈化條件
3.4脫水及濃縮
先用10mL二氯甲烷預(yù)洗干燥柱，加入上述洗脫液過柱，再加入2mL二氯甲烷洗柱，收集流出液。用氮吹儀進(jìn)行濃縮至1.0mL，加入乙腈3mL，再次濃縮至0.5mL以下，定容至0.5mL，待測。
3.5色譜測定條件
色譜柱：ODS，粒徑5μm，柱長250mm，內(nèi)徑4.6mm；
流速：1.2mL/min；
進(jìn)樣體積：10μL。
流動相：A乙腈；B水，梯度如下表：
表2 梯度表
檢測波長：苯并（a）芘 最大吸收波長295nm。
3.6標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
取一定量苯并芘標(biāo)注使用液和十氟聯(lián)苯標(biāo)準(zhǔn)使用液于乙腈中，制備濃度分別為0.1、0.5、1.0、5.0、10.0μg/mL，貯存在棕色小瓶中，于冷暗處存放。將5種濃度的標(biāo)準(zhǔn)使用液通過定量環(huán)注入10μL進(jìn)入液相色譜，得到各不同濃度的苯并芘色譜圖。以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3.7樣品及空白的測定
取同樣量的樣品注入高效液相色譜儀中，記錄色譜峰的保留時間和峰面積。對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到樣品中苯并芘的含量。在分析樣品的同時，以蒸餾水代替水樣，作為空白試驗(yàn)，按照樣品測定的相同步驟進(jìn)行分析，檢測分析果過程中是否有污染。
4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
4.1計算公式
ρ——樣品中苯并芘的質(zhì)量濃度，μg/L;
ρi——從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查的組分的質(zhì)量濃度，μg/L;
V1——萃取液濃縮后的體積，μL;
V——水樣體積，mL.
4.2結(jié)論
采用SPE400全自動機(jī)械臂固相萃取儀可以快速對樣品提取液進(jìn)行凈化和富集，可做到無人看守、批量處理，省去實(shí)驗(yàn)員繁瑣的加液取液等人工操作，方便快捷。采用SPE400全自動機(jī)械臂固相萃取儀對樣品提取液可以精準(zhǔn)的控制進(jìn)樣、加液等流速，有利于固相小柱進(jìn)行萃取分離，從而實(shí)現(xiàn)較好的樣品檢測重復(fù)性。
參考文獻(xiàn)
[1]《HJ 478-2009 水質(zhì) 多環(huán)芳烴的測定 液液萃取和固相萃取高效液相色譜法》[S].